与许多梦想进入演艺圈的女孩不同,杨祖青在高中时期从未想过会做演员这个职业,然而阴差阳错,她在报考大学时考进了表演系,四年的学习与摸索让她越来越喜欢这个行业。读书期间,杨祖青就开始经常接拍一些广告。大学毕业后,杨祖青只身来到北京,开始接演一些影视剧,逐渐在演艺圈崭露头角。
杨祖青2009年,杨祖青出演古装剧《黛玉传》,自此开始演艺事业；11月,与贾静雯,吴秀波等合作出演家庭情感剧《大爱无敌》。2010年6月,出演由马鲁剑执导的民国剧《风雨雕花楼》。2012年,出演由李欣蔓执导的伦理片《金牌,小姐和猫》。2013年,与张佳宁,黄明等合作出演都市喜剧《邻居也疯狂》,她在剧中饰演李子晴的闺蜜许多。2014年,与王子文,林申合作出演青春励志剧《青春无季》,她在剧中饰演秀外慧中的治安大队队员李露西；11月,主演都市青春喜剧《麻辣主播》,她在剧中饰演单纯而善良的电台主播亚弯。2015年4月,与佟大为,王丽坤,邓家佳等合作出演都市爱情剧《想明白了再结婚》,她在剧中饰演热心为家事不断的龙夏排忧解难的同事陈淼；6月,出演由刘全玮执导的都市剧《蝴蝶劫》；同月,与刘芳毓,解惠清等合作出演抗战剧《铁血将军》,她在剧中饰演立志为抗战事业奉献一份力量的大户人家的小姐陆菁菁；7月,出演由丁黑执导的都市情感剧《拥抱星星的月亮》,她在剧中饰演年轻貌美,唯利是图的物质女的郑春。2016年11月,杨祖青出演根据秦简同名小说改编的古装电视剧《锦绣未央》,她在剧中饰演痴恋于叱云南将军的叱云家死士红罗。2018年3月25日,与李宁,吴雨诺,尤亦泽合作出演的奇幻电影《心想事成杂货铺》在爱奇艺独家播出。
宣传照片外形靓丽的杨祖青,在影视剧《拥抱星星的月亮》中,凭借对角色的走心演绎,将剧中爱慕虚荣的刁钻美人“郑春”的市侩蛮横,展现得淋漓尽致。在伴随角色成长的同时,杨祖青褪去了演员的生涩,通过不讨喜的“郑春”,获得了观众的认可,也证明了她日渐精进的演技。热爱表演,毫无偶像包袱的杨祖青,在戏外是一位软妹子,在戏里她却是一位翻脸女王。而在影视剧中有着精彩表现的杨祖青,突破乖巧的形象,将贪婪且势利的“坏女人”诠释得恰到好处,赢得了观众的喜爱。